③?降解组： 情况同转录组；

④?lncRNA和circRNA测序： 影响极大，建库方式决定了如果污染，若不给予处理，数据可能完全没法用，故对该问题需要高度警戒。

常见问题分析

得率低：

①?样品裂解或匀浆处理不彻底；

②?RNA沉淀未完全溶解。

A260/A280<1.65（RIN<7）：

?①检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高；

?②样品匀浆时加的试剂量太少；

?③?匀浆样品时未在室温放置5分钟；

?④?吸取水相时混入了有机相；

?⑤?RNA沉淀未完全溶解。

? RNA降解：

? ①组织取出后没有马上处理或冷冻；

? ②待提取RNA的样品保存在了-5至-20℃；

? ③细胞在用胰酶处理时过度；

? ④溶液或离心管未经RNase去除处理；

? ⑤电泳时使用的甲醛pH值低于了3.5。

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